簡單、有效的Cell Direct RT技術,只需(xu)7min即(ji)可(ke)得(de)到RNA樣本。
樣(yang)品需求量(liang)小(xiao),最少10個培養細胞即可(ke)進行實(shi)驗。
高通量,可以(yi)快(kuai)速對(dui)384、96、24、12、6 孔板等培養細胞進(jin)行RNA檢測(ce)。
DNA Eraser能夠快速去除(chu)釋放的基因組,大大降低(di)對(dui)后(hou)續實驗結果的影(ying)響。
優化的RT及qPCR體系,使(shi)兩步法RT-PCR具有更高效的逆轉錄(lu)和PCR特異(yi)性(xing)(xing)、更強的RT-qPCR反應(ying)抑制(zhi)物耐受性(xing)(xing)。
產品名稱 | 細胞直接RT-qPCR試劑盒-Taqman QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–Taqman | |
貨(huo) 號(hao) | DRT-01021 | DRT-01022 |
規 格 | 200 T | 1000 T |
價(jia) 格 | 詢價 | 詢價 |
描 述 | 直接(jie)裂解(jie)細胞釋(shi)放RNA,進(jin)行RT-qPCR;高耐受性體(ti)系,使得無需純化(hua)RNA,直接使(shi)用(yong)細胞裂解產物(wu)即可作為RNA模板進行RT反應 |
產品名稱 | 細胞直接RT-qPCR試劑盒-Taqman組分補充包-1 Cell Lysis Solution / 細胞裂解液(24-well lysis system / well) | |
貨 號 | DRT-01021-A1 | DRT-01021-A2 |
規(gui) 格(ge) | 100 T | 500 T |
價 格 | 詢(xun)價 | 詢(xun)價 |
描(miao) 述 | 快速裂解(jie)細(xi)胞,釋放(fang)核酸(suan);試劑盒補充組分,可單購(gou)買。 |
產品名(ming)稱 | 細胞直(zhi)接(jie)RT-qPCR試劑(ji)盒-Taqman組分補充包-2 5× Direct RT Mix / RT反應液(20 μL reaction system) |
貨 號 | DRT-01021-B1 |
規 格 | 200 T |
價 格 | 詢價 |
描 述 | 直接RT反應體系;試劑盒補充組分,可單購買。 |
產品名稱 | 細胞直接RT-qPCR試劑盒-Taqman組分補充包-3 2× qPCR Mix / qPCR反應液(20 μL reaction system) | |
貨 號(hao) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
規 格 | 200 T | 1000 T |
價 格 | 詢(xun)價 | 詢價 |
描 述 | 直接(jie)RT后qPCR反應體系;試劑盒補充組分,可單購買。 |
產(chan)品介(jie)紹
本產品(pin)采用獨特的裂解緩沖(chong)體系可以(yi)快速(su)的從培養細胞樣本中釋放出RNA,用于(yu)RT-qPCR反應,消除了費(fei)時費(fei)力的RNA純化過程,只需(xu)7min即(ji)可得到所需要的RNA模板,配合試劑盒提供的5× Direct RT Mix 、2× Direct qPCR Mix-Taqman能(neng)夠快速有效(xiao)的得到實時定量PCR結果。
5× Direct RT Mix 和(he)2× Direct qPCR Mix-Taqman 具有很強的抑制物耐受(shou)性,能以待測樣本的裂解(jie)液為(wei)模板,進行高(gao)效逆轉和特(te)異性擴(kuo)增。該試劑包含福際高(gao)RNA親和性Foregene Reverse Transcriptase、Hot D-TaqDNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液(ye)、PCR優化劑和(he)穩(wen)定(ding)(ding)劑,與裂(lie)解(jie)緩沖液(ye)配合使(shi)用能夠快速簡便地對樣(yang)品進(jin)行檢測,并(bing)具有靈敏度高(gao)、特異性(xing)強、穩(wen)定(ding)(ding)性(xing)好等特點。
試劑盒應用
適用范圍:培養細胞。
樣(yang)本裂解釋放的RNA:僅適用于本試劑(ji)盒的RT-qPCR模板(ban)。
試劑(ji)盒可用于以下用途:基因調控(kong)表達分析、等位基因檢測、藥物篩查等。
試劑盒局(ju)限性
擴(kuo)增片段(duan)≤300bp。
試劑盒用于新鮮(xian)培養細(xi)胞。
試(shi)劑盒內容
Part I
Buffer CL:提(ti)供(gong)細(xi)胞裂解(jie)反應所需環境。
Buffer ST:終止裂(lie)解液中(zhong)的活性物質,避免對后(hou)續RT造成(cheng)影響。
Foregene Protease Plus II:在裂解緩沖(chong)液的(de)環境下,裂解細胞,釋放核酸。
Part II
DNA Eraser:DNA 去除劑,去除基因組(zu)對后續(xu)實驗的影響。
5× Direct RT Mix:包含(han)福際生物專門研制的(de)高RNA親和性(xing)Foregene Reverse Transcriptase,以及RNase Inhibitor、dNTPs、穩定劑(ji)、增強劑(ji)、優化劑(ji)及優化配(pei)比的(de)逆轉錄引物(Random Primer、Oligo(dT)18 Primer)。
2× Direct qPCR Mix-Taqman:該試劑包(bao)含福際(ji)生物(wu)Hot D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(ying)緩(huan)沖(chong)液、PCR優化劑和穩定(ding)劑。
ROX Reference Dye:一般用(yong)于ABI、Stratagene等公司(si)的Real Time PCR擴(kuo)增儀(yi)上,用于(yu)調整PCR加(jia)樣誤差(cha)所引(yin)起的 PCR管與管之間(jian)的(de)差異。不同(tong)儀器所需ROX Reference Dye濃度(du)不同(tong),用戶可(ke)以根(gen)據儀器的(de)推薦濃度(du)添(tian)加。
RNase-Free ddH2O:無RNase滅菌(jun)超純水(shui),用(yong)于兩步(bu)法RT-qPCR反應。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸,保證試劑盒Part I、Part II處于<4℃狀態。
本試劑盒Part I保存在2-8℃;Part II保存在-20℃。
v Foregene Protease Plus II應(ying)置(zhi)于4℃保存(cun),切(qie)勿凍存于-20℃。
v 試劑2× Direct qPCR Mix-Taqman保存于-20°C;若頻繁使用,也可置(zhi)于 4°C短期保存(限 10 天內用(yong)完)。
說明書
產品(pin)文獻
MSDS
COA
Real Time PCR引物設計原則
Answer
Forward Primer和Reverse Primer
進(jin)行Real Time PCR,引物設計非常(chang)重要(yao)。引物關系到PCR擴增(zeng)的特異(yi)性(xing)、高效(xiao)性(xing)等(deng),可以參照(zhao)以下原則進行引物設計:
u 引物(wu)長度:18-30bp。
u GC含(han)量:40-60%。
u Tm值:引(yin)物設計軟件,如(ru)Primer 5,可(ke)以給出引物(wu)的Tm值(zhi)。上下游引物的Tm值(zhi)應(ying) 盡量接近(jin)。也可以使用Tm計算公(gong)式:Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。進行PCR時,一般選擇低于引物Tm值5℃的溫度作為退火溫度(相應的提高退火溫度(du)可(ke)以(yi)增加PCR反應的特異(yi)性(xing))。
u 引物及PCR產物:
v 設計引物(wu)PCR擴增產物長度最好在100-150bp。
v 應盡(jin)量避開(kai)在模板的二級結(jie)構區域設計引物(wu)。
v 避免上下游引(yin)物3’端(duan)之間形成2個或2個以上的互補堿基。
v 引物3’端堿基不(bu)能存在(zai)多(duo)余3個(ge)連續的G或C。
v 引(yin)物自(zi)身不能存(cun)在互(hu)補(bu)結構,否則會形成發夾結構,影響(xiang)PCR擴增(zeng)。
v 引物(wu)序(xu)列中ATCG應盡量分布(bu)均(jun)勻(yun),3’端堿(jian)基避免為T。
Probe
探針(zhen)選擇要(yao)保守,引物選擇要(yao)保守,因此(ci)必須找一段(duan)100-200bp相對要保守(shou)的(de)片段來設計引物(wu)與探針。即real-time PCR的擴增片段是(shi)50bp-150bp。當找不(bu)到150bp的保(bao)守片段時,必須確保(bao)探針的片段是(shi)保(bao)守的。一般按照以下原則進行Probe的(de)設(she)計:
u 探(tan)針位(wei)置盡可能地靠(kao)近上游引物。
u 探針長度應(ying)在(zai)15-45bp(最好是20-30bp),以保證結合(he)特異性。
u 檢測探針的DNA折疊(die)和二級結構。
u Tm值在65-70℃,通常比引(yin)物TM值高5-10℃(至少要5℃),GC含量在40%-70%。
u 探針的5’端應避(bi)免(mian)使用G鳥(niao)嘌呤——因為5’G會有淬滅作用,而(er)且即使是(shi)被切(qie)割下來還會存在淬滅作用。
u 整條探針中,堿基C的含量要明顯高于G的含量——G含量高會(hui)降低反應效率,這(zhe)時就應選擇配對(dui)的另一條鏈作為探針。
u 為確(que)保引物探針(zhen)的特(te)異(yi)性(xing),最好將設計好的序列在blast中核(he)實一次,如果發(fa)現有非(fei)特異性互補區(qu),建(jian)議(yi)重新設計引物探針。
采用獨特的裂解緩沖體系,只需 7 min 即可得到所需要的 RNA 模板,進行RT-qPCR檢測。
該試劑(ji)盒針對 96 孔培(pei)養細胞進(jin)行(xing)微量(liang)體系裂(lie)解(jie),具有很好(hao)的均(jun)一(yi)性和一(yi)致性,能(neng)滿(man)足 96 孔細胞整版一(yi)次性使(shi)用(yong),避免試劑(ji)反復開啟、凍融等操作帶來的污染和試劑(ji)性能(neng)降低。
采用獨特的裂解緩沖體系,只需 7 min 即可得到所需要的 RNA 模板,進行RT-qPCR檢測。
該(gai)試劑盒(he)針對 96 孔培養(yang)細胞進行微量體系裂解,具有很好的均(jun)一性(xing)和一致性(xing),能(neng)滿足(zu) 96 孔細胞整版一次性(xing)使用,避免(mian)試劑反復(fu)開啟、凍(dong)融等操作帶來的污染(ran)和試劑性(xing)能(neng)降(jiang)低。
無需純(chun)化,快速從細胞中釋放RNA,直接進行RT反應(ying);搭配試劑盒提供的Direct qPCR Mix進行qPCR反應(ying)鑒定(ding)。